人鐵蛋白(Ferritin)ELISA試劑盒檢測(cè)原理
人鐵蛋白(Ferritin)ELISA試劑盒的檢測(cè)原理主要基于?雙抗體夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)?(ELISA),通過(guò)特異性抗體識(shí)別并定量檢測(cè)樣本中的人鐵蛋白濃度,具有高靈敏度和良好特異性。
一、核心檢測(cè)流程
固相抗體包被?
酶標(biāo)板微孔內(nèi)預(yù)包被了高親和力的?特異性單克隆抗人鐵蛋白抗體?,作為“捕獲抗體",用于固定樣本中的目標(biāo)抗原。
樣本與標(biāo)準(zhǔn)品加樣?
向微孔中加入待測(cè)樣本或已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品。若樣本中含有鐵蛋白,會(huì)與包被抗體特異性結(jié)合,形成“固相抗體-抗原"復(fù)合物。
酶標(biāo)抗體結(jié)合?
加入?HRP(辣根過(guò)氧化物酶)標(biāo)記的檢測(cè)抗體?,該抗體識(shí)別鐵蛋白的另一表位,從而形成“固相抗體-抗原-酶標(biāo)抗體"的夾心結(jié)構(gòu)。
洗滌去除非特異成分?
通過(guò)多次洗滌,去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體及其他雜質(zhì),減少背景干擾,提高檢測(cè)準(zhǔn)確性。
顯色反應(yīng)?
加入TMB底物液,在HRP催化下生成藍(lán)色產(chǎn)物,反應(yīng)一定時(shí)間后加入1N鹽酸終止反應(yīng),溶液顏色由藍(lán)變黃。
吸光度測(cè)定與定量分析?
使用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定各孔的吸光度(OD值)。OD值與樣本中鐵蛋白濃度呈正比,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線即可計(jì)算出待測(cè)樣本的實(shí)際濃度。
二、特點(diǎn)
?高特異性?:采用兩種不同表位的單克隆抗體,顯著降低交叉反應(yīng)風(fēng)險(xiǎn)。
?靈敏度高?:可檢測(cè)低至幾ng/mL的鐵蛋白水平,適用于早期篩查和科研定量。
?操作標(biāo)準(zhǔn)化?:試劑盒提供完整組分和說(shuō)明書(shū),適合批量樣本處理。
注意:以上僅供參考,不作為實(shí)際數(shù)據(jù),實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說(shuō)明或咨詢技術(shù)老師。
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